2022-714
實驗方法1.將實驗小鼠脫頸處死，75%乙醇浸泡5min，固定，備皮，取背部皮膚至于含雙抗的冷PBS緩沖液中。2.仔細剝離脂肪，血管等多余組織，PBS清洗，加胰酶消化1h。3.分離真表皮，去除表皮后，PBS清洗3次。4.將真皮部分于培養皿內剪碎，加入適量胰酶，轉移至15ml離心管內，37℃恒溫水浴消化1h。5.消化結束后，加入H-DMEM*培養基終止反應，1000rpm離心5min，棄上清。6.PBS清洗一遍，離心棄上清。7.將清洗后的組織塊均勻鋪于6cm培養皿內，加入2ml*...
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外泌體是細胞分泌到胞外的一種囊泡，其大小為30-150nm，具有雙層膜結構和茶托狀形態，含有豐富的內含物（包括核酸、蛋白和脂質等），參與細胞間的分子傳遞。外泌體廣泛存在于細胞培養上清以及各種體液中，細胞外泌體研究是近些年研究的熱點。細胞外泌體主要原理是根據外泌體的密度、粒徑、沉降系數和親和力等差異進行分離，提取方法包括傳統的差速離心、密度梯度離心，以及后來發展的超濾法、聚合物沉淀法、免疫分離、隔離篩選法、體積排阻色譜法等。這些方法各有利弊。細胞外泌體研究常見問題：1、培養細胞...
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1.將新生24h的SD大鼠用75%乙醇浸泡5min，開胸，取出心臟后于含有雙抗的預冷過的D-HANKS中漂洗兩遍，移入超凈臺。2.仔細剪除大血管，左右心房及右心室和室間隔，保留左心室，去除內、外膜，PBS清洗。3.用眼科剪將心室肌剪碎至約1mm3，滴加1ml胎牛血清，均勻接種于6cm細胞培養皿內，組織塊間隔1-2mm，放入5%CO2，37℃恒溫培養箱內培養。4.4小時后去除培養皿，加入3ml含有20%FBS和1%雙抗的H-DMEM培養基，繼續培養。5.一般情況下48小時后可見...
查看更多2022-630
一.實驗方法1.多聚賴氨酸（Poly-D-Lysine）包被培養板的制備：原代分離進行前一天，用PBS緩沖液配制終濃度為0.1mg/ml的多聚賴氨酸工作液，0.22μm濾膜過濾除菌，于超凈工作臺內吸取1ml加入六孔板內，確保覆蓋板底，靜置孵育30min后吸出（可回收反復使用2-3次），用無菌水清洗培養板，置于超凈臺內晾干，照紫外過夜。2.次日，取出生24h以內的SD大鼠，75%乙醇浸泡消毒5min。3.棉球吸干乳鼠體表的乙醇，迅速斷頭，浸泡于冰冷的含有2%雙抗的PBS緩沖液中...
查看更多2022-614
研究中常用的細胞系/株系是現成的，我們只需要進行細胞傳代和種子保存。然而，這些細胞系往往因長期體外培養而失去原有的生物學特性，對藥物治療的反應差距越來越大。因此，越來越多的人選擇原代細胞。來源于胚胎、組織、器官和外周血，經特殊分離方法制備的原代培養細胞稱為原代細胞。原代細胞培養，也稱為原代培養，是從供體獲得的組織細胞在體外的培養。原代細胞是接近和最能反映體內生長特性的細胞，適用于藥敏試驗、細胞分化等實驗研究。原代細胞分離培養都有哪幾種方法？1、組織培養法組織培養是一種常見、簡...
查看更多2022-511
充質干細胞是人體內一類具有自我更新和多向分化潛能的原始細胞群。根據遺傳來源的分類，干細胞可分為胚胎干細胞和成體干細胞。其中，胚胎干細胞具有發育全能性，是干細胞研究和應用中具吸引力的一種。然而，關于胚胎干細胞的研究一直存在倫理爭議。與胚胎干細胞相比，成體干細胞具有獲取方便、致瘤風險低、無倫理爭議等優點。因此，成體干細胞已成為干細胞臨床應用研究的主要對象。在成體干細胞的許多臨床研究中，充質干細胞是最多的。間充質干細胞是一種來源于中胚層的成體干細胞，具有自我更新和多向分化的潛能。間...
查看更多2022-413
原代細胞分離培養有哪些注意事項？1、組織塊培養法（1）接種后的前3天，觀察和移動時注意不要引起液體振蕩。避免頻繁的翻倒和振動，否則組織塊不易附著在瓶壁上或附著后脫落飄浮。（2）加入的培養基不宜過多，以免浸泡的組織因輕微波動而脫落。（3）細胞向外遷移時，注意記錄并清除漂浮的組織塊和殘留細胞。它們產生的有毒物質會影響原代細胞的生長。（4）為促進組織塊盡快貼在培養瓶上，可在種植前在培養瓶底壁涂上一層薄薄的膠原蛋白。2、貼壁原代細胞（1）原代細胞分離培養的分離細胞一次接觸體外環境時，...
查看更多2022-315
充質干細胞是一種早期未分化細胞，具有自我更新、自我復制、無限增殖和多向分化潛能等特點。它們可以分泌細胞因子，減輕炎癥，減少組織細胞凋亡，促進內源性組織器官干祖細胞的增殖，進行免疫調節，從而達到作為種子細胞修復組織器官的效果。經過連續傳代和冷凍保存后，仍具有多向分化潛能，被醫學界稱為“萬能細胞”。隨著研究的深入，發現充質干細胞實際上是一組具有高自我更新能力和不同分裂增殖能力的多能干細胞。它們可以在體外培養和擴增，也可以在特定條件下分化成神經細胞、成骨細胞、軟骨細胞、肌肉細胞、脂...
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